Machine d'extraction et de détection d'acide nucléique entièrement automatique de New Tech

Cinq points forts :
● Instrument configuré avec l'extraction d'acide nucléique et l'étape de purification
● Instrument configuré avec un module d'extraction par ultrasons
● Instrument configuré avec un système entièrement automatique
● Instrument configuré avec une amplification à température variable
● Instrument configuré avec un kit de réactifs entièrement fermé

1.Les réactifs de détection des acides nucléiques doivent-ils être extraits et purifiés ?
Le principe de détection des acides nucléiques est le suivant : sous l'action d'une amorce, l'ADN polymérase est utilisée pour effectuer une amplification par réaction en chaîne sur une matrice ADN/ARN (nécessitant une transcription inverse de NA), puis la quantité de signal fluorescent libéré est détectée pour déterminer si l'échantillon contient l'acide nucléique (ADN/ARN) de l'agent pathogène à détecter.

1) Les échantillons qui n'ont pas été extraits ou purifiés peuvent contenir de nombreux composants qui affectent le résultat final : nucléase (qui peut dissoudre l'acide nucléique cible et provoquer des faux négatifs), protéase (qui peut réduire l'ADN polymérase et provoquer des faux négatifs), métaux lourds. sel (qui conduit à l'inactivation de la synthase et provoque des faux positifs), pH trop acide ou trop alcalin (ce qui peut provoquer l'échec de la réaction), ARN incomplet (conduisant à un échec de transcription inverse faux négatif).

2) Certains échantillons sont difficiles à amplifier directement : les Gram positifs et certains parasites, en raison de leurs parois cellulaires épaisses et d'autres structures, s'ils ne passent pas par le processus d'extraction et de purification de l'acide nucléique, le kit sans extraction peut échouer pour de tels échantillons. des échantillons.

Par conséquent, il est recommandé de sélectionner le kit de test ou l’instrument configuré avec l’étape d’extraction de l’acide nucléique.

2. Extraction chimique ou extraction physique par fragmentation ultrasonore ?
D'une manière générale, l'extraction chimique peut être appliquée à la plupart des opérations de prétraitement et de purification.Cependant, chez les bactéries Gram-positives à parois épaisses et certains parasites, il arrive également que l'extraction chimique ne puisse pas obtenir de matrices d'acide nucléique efficaces, ce qui entraîne une détection de faux négatifs.De plus, l'extraction chimique utilise souvent des agents puissants ; si l'élution n'est pas complète, il est facile d'introduire un alcali fort dans le système réactionnel, ce qui entraîne des résultats inexacts.

La fragmentation par ultrasons utilise le broyage physique, qui a été utilisé avec succès par GeneXpert, une entreprise leader dans le domaine du POCT à usage humain, et présente un avantage absolu dans l'extraction d'acide nucléique de certains échantillons complexes (tels que Mycobacterium tuberculosis).

Par conséquent, il est recommandé de sélectionner un kit de test ou un instrument configuré avec une étape d’extraction d’acide nucléique.et c'est optimal s'il y a un module d'extraction par ultrasons.

3. Manuel, semi-automatique et entièrement automatique ?
Il s’agit d’un problème de coût de la main-d’œuvre et d’efficacité du travail.À l'heure actuelle, les hôpitaux pour animaux de compagnie manquent de personnel, et l'extraction et la détection des acides nucléiques est un travail qui nécessite certaines compétences et expérience.Il ne fait aucun doute que la machine d’extraction et de détection d’acide nucléique entièrement automatique est le choix parfait.

4. Amplification à température constante ou amplification à température variable ?
La réaction d'amplification est un lien de détection d'acide nucléique, et la technologie professionnelle impliquée dans ce lien est complexe.En gros, les enzymes sont utilisées pour amplifier l’acide nucléique.Dans le processus d'amplification, le signal de fluorescence amplifié ou le signal de fluorescence intégré est détecté.D'une manière générale, plus le signal de fluorescence apparaît tôt, plus la teneur en gènes cibles de l'échantillon est élevée.

L'amplification à température constante est une amplification d'acide nucléique à température fixe, tandis que l'amplification à température variable est une amplification cyclique strictement selon dénaturation-annelage-extension.Le temps d'amplification à température constante a été réalisé, tandis que le temps d'amplification à température variable est grandement affecté par la vitesse de montée et de descente de la température de l'instrument (à l'heure actuelle, de nombreux fabricants ont pu effectuer 40 cycles d'amplification en 30 minutes environ).

Si les conditions de laboratoire sont bonnes et le zonage strict, il est raisonnable de dire que la différence de précision entre les deux ne sera pas grande.Cependant, l'amplification à température variable synthétisera davantage de produits d'acide nucléique dans un temps relativement plus court.Pour les laboratoires sans zonage strict et sans personnel de formation professionnelle, le risque de fuite d'aérosols d'acide nucléique sera plus grand, le faux positif se produisant une fois la fuite survenue, et qui est extrêmement difficile à éliminer.

De plus, l'amplification à température constante est également plus sujette à une amplification non spécifique lorsque l'échantillon est complexe (la température relative de réaction est plus basse et plus la température d'extension est élevée, meilleure est la spécificité de liaison de l'amorce).

En ce qui concerne la technologie actuelle, l'amplification à température variable est plus fiable.

5. Comment éviter le risque de fuite des produits d'amplification des acides nucléiques ?
À l'heure actuelle, de nombreux fabricants choisissent le tube PCR de type glande comme tube de réaction d'acide nucléique, qui est scellé par friction, et la dénaturation en température dans la dénaturation à température variable dans l'amplification PCR à température variable atteint 90 degrés.
Centigrades.Le processus répété d'expansion avec la chaleur et de contraction avec le froid constitue un grand défi pour l'étanchéité du tube PCR, et le tube PCR de type glande est relativement facile à provoquer des fuites.

Il est préférable d'adopter la réaction avec un kit/tube complètement scellé pour éviter les fuites du produit de réaction.Ce serait parfait s'il était possible de mettre au point un kit entièrement scellé pour l'extraction et la détection des acides nucléiques.

Ainsi, la nouvelle machine entièrement automatique d'extraction et de détection d'acide nucléique de New Tech propose les cinq choix optimaux ci-dessus.